Etiquetado de transposones , la enciclopedia libre

El etiquetado de transposones, también llamado STM, STTM, transposon taggin^[1] en inglés, es una técnica que permite identificar genes en las bacterias que son esenciales para el proceso de infección en un animal modelo. Fue inventada por David Holden.

Características de está técnica

es un método de selección negativa para la identificación de genes de virulencia basándose en la mutación
es un método rápido
utiliza un pequeño número de hospedadores
requiere un patógeno haploide que será objeto de mutagénesis por inserción
infecta a su huésped como una población mixta
genera cepas atenuadas.
no requiere ningún conocimiento de la naturaleza del producto del gen
sólo depende de los patrones de expresión de un fenotipo mutante
no revela genes esenciales

Metodología

Un pool de bacterias es mutageneizado por inserción de los tranposones que porta un "'tag'", una secuencia única que ayuda a identificarlos. Se genera así una biblioteca de bacterias mutantes.
Este paso se repite para diferentes "tag", obteniéndose varias bibliotecas cada una de ellas con un "tag" diferente.
Se hace un screening in vivo de las bibliotecas, para ello se arman distintos pooles conteniendo clones con diferentes "tag", que son inoculados en un animal inmunodeprimido
Se recogen las bacterias del animal y se identifican los "tag" faltantes, es decir los que corresponden a los genes necesarios para la virulencia. Nótese que bacterias sin estos genes, no pueden infectar ni reproducirse.
De la biblioteca original se levanta la secuencia de estos

De esta manera se puede conocer la secuencia de los genes implicados en la virulencia.

Aplicaciones

Etiquetado de Transposones en bacterias

Esta tecnología se ha utilizado ampliamente en Salmonella typhimurium, descubriendo 28 genes de virulencia en solo seis meses, la mitad de los cuales habían sido previamente identificados como necesarios para la infección, investigaciones que llevaron más de 20 años. La técnica es aplicable a una amplia gama de microorganismos y ya ha sido aplicado con éxito a Neisseria meningitidis Streptococcus y Mycobacterium tuberculosis agente causal de la tuberculosis.

Etiquetado de Transposones en plantas

Mediante el uso de esta técnica, los investigadores han podido añadir diversos elementos genéticos al maíz^[2] y en algunas otras especies (como el tabaco,^[3] etc^[4]

Propiedad Intelectual

Esta tecnología tiene derechos de propiedad industrial

US Patent Number US 5876931 Granted March 1999
US Patent Number US 6015669 Granted January 2000
European Patent Number EP796341B Granted Sept 1998

Referencias

^[1]

↑ ^a ^b McClean, Phillip (1998). «Transposon Tagging».
↑ Brutnell, Thomas (2002). «Transposon tagging in maize». Functional & Integrative Genomics 2 (1-2): 4-12. PMID 12021846. doi:10.1007/s10142-001-0044-0.
↑ Dinesh-Kumar, S. P.; Whitham, S.; Choi, D.; Hehl, R.; Corr, C.; Baker, B. (1995). «Transposon Tagging of Tobacco Mosaic Virus Resistance Gene N: Its Possible Role in the TMV-N-Mediated Signal Transduction Pathway». Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 92 (10): 4175-4180. JSTOR 2367289. PMC 41906. PMID 7753780. doi:10.1073/pnas.92.10.4175.
↑ Fladung, M; Deutsch, F; Hönicka, H; Kumar, S (2004). «T-DNA and Transposon Tagging in Aspen». Plant Biology 6 (1): 5-11. PMID 15095129. doi:10.1055/s-2003-44745.

Otras referencias

Henri L Saenz and Christoph Dehio, (2005), Signature-tagged mutagenesis: technical advances in a negative selection method for virulence gene identification, Current Opinion in Microbiology 2005, 8:612 – 619

Datos: Q7835336

[NDSU-1] McClean, Phillip (1998). «Transposon Tagging».

[pmid12021846-2] Brutnell, Thomas (2002). «Transposon tagging in maize». Functional & Integrative Genomics 2 (1-2): 4-12. PMID 12021846. doi:10.1007/s10142-001-0044-0.

[pmid7753780-3] Dinesh-Kumar, S. P.; Whitham, S.; Choi, D.; Hehl, R.; Corr, C.; Baker, B. (1995). «Transposon Tagging of Tobacco Mosaic Virus Resistance Gene N: Its Possible Role in the TMV-N-Mediated Signal Transduction Pathway». Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 92 (10): 4175-4180. JSTOR 2367289. PMC 41906. PMID 7753780. doi:10.1073/pnas.92.10.4175.

[pmid15095129-4] Fladung, M; Deutsch, F; Hönicka, H; Kumar, S (2004). «T-DNA and Transposon Tagging in Aspen». Plant Biology 6 (1): 5-11. PMID 15095129. doi:10.1055/s-2003-44745.

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